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如何正確的進(jìn)行ELISA測(cè)定操作
2017-05-18
臨床ELISA測(cè)定現(xiàn)通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測(cè)定模式，測(cè)定操作非常簡(jiǎn)單，一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結(jié)果判斷和結(jié)果報(bào)告及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會(huì)影響測(cè)定結(jié)果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚?，F(xiàn)分述如下。一、臨床標(biāo)本的收集和保存用于ELISA測(cè)定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清（漿），有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測(cè)目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前臨床上使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)...
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PEI細(xì)胞轉(zhuǎn)染液使用方法
2017-05-12
使用方法接種細(xì)胞：用膠原酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。轉(zhuǎn)染前18-24小時(shí)進(jìn)行細(xì)胞的鋪板，以便在轉(zhuǎn)染時(shí)，貼壁細(xì)胞的密度大約在80%左右。注：培養(yǎng)液中的血清和抗生素不影響轉(zhuǎn)染效率。2.準(zhǔn)備EZTrans-DNA復(fù)合物（1）轉(zhuǎn)染前將所有試劑置于室溫10分鐘。下面，以轉(zhuǎn)染24孔板培養(yǎng)皿為例，說(shuō)明轉(zhuǎn)染的具體方法（如果在別的培養(yǎng)器皿中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，各試劑建議使用量見(jiàn)表1.：（2）將1μg質(zhì)粒DNA稀釋到40μL無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，用移液槍吹吸3-4次。（3）將3μLEZTran...
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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)有哪些禁忌？
2017-04-25
ELISA檢測(cè)系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為敏捷的技術(shù)手段。自己也為此苦惱過(guò)很長(zhǎng)一段時(shí)間，跟著自己技術(shù)水平得進(jìn)步，或多或少地也把握了ELISA體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現(xiàn)在做方陣，做ELISA已是輕車熟路了，以前檢測(cè)一種抗體用整整一下戰(zhàn)書(shū)還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色，一個(gè)工作日基本搞定。ELISA試劑盒可是在新老手操縱過(guò)程中老是會(huì)泛起或大或小的題目，本人在剛開(kāi)始做ELISA時(shí)就面對(duì)良多災(zāi)題，固然有師兄師姐鋪路，但仍是經(jīng)常做得烏煙瘴氣，好比說(shuō)花板...
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特級(jí)胎牛血清說(shuō)明書(shū)
2017-04-19
產(chǎn)品描述李記胎牛血清每一批原材料都經(jīng)嚴(yán)格篩選，經(jīng)過(guò)3次100nm(0.1μm)過(guò)濾，過(guò)濾材料符合美國(guó)FDA文件要求（21CFR211.72），整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程符合胎牛血清生產(chǎn)、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)（EuropeanUnion(EU)Approved）。內(nèi)毒素含量≤5EU/ml，100%不含病原性病毒（BVDV,IBRV,BPIV3），血紅蛋白含量≤0.02%(w/v)，批次間質(zhì)量穩(wěn)定，適合于多種細(xì)胞培養(yǎng)，也可用于原代細(xì)胞、部分干細(xì)胞的培養(yǎng)。血清中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白質(zhì)...
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cy染料小動(dòng)物活體成像操作流程
2017-04-13
吲哚花菁綠(ICG，indocyaninegreen)是經(jīng)過(guò)FDA認(rèn)證的菁染料，出于安全考慮，后期應(yīng)用于活體（人、動(dòng)物、細(xì)胞）的染料在結(jié)構(gòu)上都和ICG有相似或相近之處。cy系列染料是Amersham公司（目前為GE公司）zui初開(kāi)發(fā)的染料體系，它的橋環(huán)由苯并吲哚變?yōu)檫胚岘h(huán)，并在吲哚的苯環(huán)上對(duì)稱地引入硫酸根基團(tuán)，水溶性得到很大改善，分子量降低后對(duì)大分子的親和力有所增加。cy系列菁染料多帶有羥基琥珀酰亞胺活性酯(NHSester)、異硫氰酸酯(NCS)等活性基團(tuán)，可與蛋白質(zhì)、多肽...
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不接觸染料也能進(jìn)行DNA電泳的分析
2017-02-24
問(wèn)：您是否為EB有毒，安全染料貴的問(wèn)題而煩惱？答：試試?yán)钣浬锏腄NA電泳套裝吧!圖1：I、Hela細(xì)胞與EB,李記套裝的上樣buffer及李記GelRed在室溫下孵育一小時(shí)，用Olympus熒光顯微鏡觀察并拍照，與EB孵育的細(xì)胞顯示出綠色熒光，表明染料已透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞并與核酸結(jié)合。李記套裝的上樣buffer及李記GelRed未顯示熒光，說(shuō)明李記染料未能透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞。II、EB,李記套裝的上樣buffer及李記GelRed染料相同DNA濃度下染色效果。李記生物的DN...
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細(xì)胞凍存和復(fù)蘇經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
2016-11-29
細(xì)胞凍存過(guò)程對(duì)保持細(xì)胞狀態(tài)影響巨大，李記生物結(jié)合多年實(shí)踐，總結(jié)出如下實(shí)用的細(xì)胞凍存流程?！奥齼隹烊凇笔羌?xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則，這對(duì)zui大限度的保存細(xì)胞活力至關(guān)重要。目前細(xì)胞凍存多用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作為保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性；細(xì)胞凍存和復(fù)蘇時(shí)，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶產(chǎn)生是關(guān)鍵。緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的物理?yè)p傷。復(fù)蘇細(xì)胞采用快速融化的方法可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)融化，避免由于緩慢融化使水分滲...
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高分辨率熔解曲線（HRM）分析指南
2016-10-10
HRM(HighResolutionMeltinganalysis，高分辨熔解曲線)同許多熒光PCR技術(shù)一樣，是利用特定dsDNA染料可以插入DNA雙鏈小溝中（PCR產(chǎn)物）的特性，通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)升溫過(guò)程中dsDNA解鏈，熒光染料脫落，熒光信號(hào)減弱或消失的過(guò)程，高分辨記錄熔解曲線，從而對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。HRM技術(shù)利用dsDNA的物理性質(zhì)，準(zhǔn)確反映DNA序列堿基配對(duì)特異性與解鏈溫度變化的情況，無(wú)需使用特異性標(biāo)記探針，不受突變種類和突變位點(diǎn)的限制，具有高靈敏度和特異性、高通量、操作簡(jiǎn)單...
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